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一级菌种培养基的制备实验!

时间:2019-09-06 点击:165次

 一级菌种培养基的制备实验!

一、实验目的
1.了解一级菌种培养基配制的原则;
2.掌握一级菌种培养基配制的工艺流程;
3.学会一级菌种培养基配制的具体方法步骤;
4.学会棉塞的制作方法和手提式高压蒸汽锅的使用方法。
二、实验设备、工具和材料
手提式高压锅、1000~1500W电炉、感量1/10g的粗天平、1000mL量杯、玻璃漏斗、漏斗架各一个,8~10cm长乳胶管一根,止流夹一个,20mm×200mm试管150支左右,铁丝筒两个,小刀和剪子一把,普通棉花250g,牛皮纸、马铃薯、琼脂和葡萄糖或蔗糖适量。
三、实验步骤
(1)取适量马铃薯,削去皮,挖去芽眼。称取200g,切成薄片或小块,用清水淘洗之后,放入锅内,加水1200mL,用文火煮沸20~30min,用四层纱布过滤,取滤液1000mL,如不足加水补足1000mL。
(2)称取琼脂20g,洗净剪碎,加入马铃薯煮出液中,用文火加热,边煮边搅拌,直至全部琼脂融化,再用四层纱布过滤,并用热水补足1000mL,加入预先溶解的葡萄糖水,搅拌之后煮2min后停火。
(3)分装试管。根据要求,用1%盐酸或1%氢氧化钠溶液调整酸碱度后,将培养基趁热分装在试管中。
先在玻璃漏斗嘴上套一段长8~10cm的乳胶管,卡上止流夹,将培养基倒入漏斗中(其余培养基要置电炉上保温)。左手握住3~5支试管,让乳胶管伸入试管中部,右手拇指和食指按下止流夹,逐一注入培养基,装入量以试管长度的1/5~1/4为宜。分装时不要让培养基沾在试管口上,若已沾上,要用干净纱布擦干净。
(4)塞棉塞。培养基分装试管后,要塞上棉塞。
制作棉塞的方法很多,这里介绍一种常用的方法。取适量棉片,在桌上铺成长12~15cm,宽12cm左右的薄棉垫,先将棉垫下部1/3向上折叠,再将上部1/3向下折叠,然后将长棉垫逆时针方向转90°,让光滑的一边向左用右手持棉垫并用拇指按住,左手拇指和食指向外旋卷,并将参差不齐的棉纤维缠住呈一圆柱形。用右手按顺时针方向将棉塞塞进管口内,塞入部分为棉塞长度的2/3。
(5)捆扎试管。塞好棉塞之后,应将试管捆成束,并用牛皮纸将棉塞部分包扎好,装进高压锅内灭菌。
(6)灭菌。用手提式高压蒸汽灭菌锅灭菌。其步骤如下。
①加水。先向锅内加水,略超过支架。
②装锅。将包扎好的试管直立放在内筒中,不要装得过紧、过满。
③关严锅盖。先将软管对好内筒插孔,盖严锅盖,对角旋紧旋钮。
④加热。插上电炉插头或推上电闸加热。
⑤排放冷空气。开始加热时将放气阀打开,待看到有大量蒸汽排出后关上放气阀。
⑥升压保压。排放冷空气之后,继续加热,当压力表指针达到0.11MPa时,开始计时,维持30min。
⑦降压排气。维持30min之后,拔下电源插头或拉开电闸,使其自然冷却,或从电炉上把锅提下来,待压力表指针降到零时,打开放气阀,排放蒸汽。
⑧出锅。排完气后,松开旋钮,将锅盖揭开一小缝,待培养基温度降至60℃左右时,取出试管。
⑨摆斜面。试管从锅内取出后,要将试管一支一支地散放在桌面上的小木条上,使之冷却成斜面。斜面长度为试管长度的2/3。
(7)空白实验。将灭菌后的斜面试管,各组随机抽取几支,放在28~32℃温箱中空白培养48~72h,如无任何杂菌生长,说明灭菌彻底,才可使用。

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