小鼠避暗仪的实验方法
实验准备
熟悉环境:实验前2天使小鼠熟悉实验室环境,自由饮食、摄水。
分组设计:按分层随机区组设计,使各组动物平均体重和性别比例相似。实验小鼠按训练方法不同分为单次适应单次电击(MOS)、单次适应限时训练(MOL)、多次适应限时训练(MUL)3组,每组根据给药不同分为对照(C)和模型(M)两个亚组,最后共6组(每组n=9)。
仪器设置:避暗仪分为明、暗两室,其间有一直径为3cm的圆洞,两室底部均铺以铜栅。暗室底部铜栅可通电,电压通过按钮调节,一般为40V,50Hz。
训练方法
MOS法:训练在一天内完成,先将小鼠放入避暗仪中适应环境3min,训练时将小鼠背对洞口放入明室内,其进入暗室受到电击即取出。
MOL法:训练在一天内完成,小鼠适应环境3min,训练3min。
MUL法:连续3天在同一时间将小鼠放入避暗仪中适应3min,第三天适应完成后开始训练,3min后取出。适应环境和训练时任小鼠在明室和暗室之间自由穿梭,步入潜伏期大于3min者弃去不用。
测试方法
记录指标:训练完成24h后将小鼠再次放入明室,记录其第一次进入暗室所需的时间,即步入潜伏期(STL)和5min内进入暗室的次数,即错误次数(ETs)。若5min内小鼠未进入暗室则STL记为300s,ETs记为0。
注意事项
实验环境
环境清理:实验前后注意清理点击栅栏动物排泄物,排泄物会影响通电性。通过酒精擦拭、晾干尽可能去除上一只动物气味,仪器设备需具备通风系统。
减少干扰:在实验过程中必须保持所有实验程序一致,如屏蔽噪音、减少气味刺激、调节光线等,实验环境应该安静、昏暗,尽量轻巧抓取动物,减少对动物的刺激。关闭两箱中间的门时要轻柔,不要制造过多外界的声响影响动物行为。
实验操作
动物适应:实验开始前3-7天,每天抓取、轻抚动物,让其适应被实验人员抓取,避免实验过程中因实验人员抓取而造成动物处于应激状态,造成实验结果不可靠的问题。
电击参数:大鼠电流为0.65-1.8mA(推荐0.8mA),或电压65-70V;小鼠电流为0.15-0.6mA(推荐0.25mA),或电压30-36V,频率为5-15Hz电流。
设备维护:实验仪器底部的铜栅容易生锈,导致电阻增加,每次实验前,应以砂纸打磨光滑。